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抗体筛选,均相发光法靠什么成为新晋宠儿?
来源: 2025-04-22 38

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近年来,生物药市场需求不断扩容,抗体药物因具有特异性强,靶向性高、治疗效果显著等优势已经成为其重要组成部分,并且呈现多元化发展。单克隆抗体占据市场的主导地位,常用的抗体筛选技术包括杂交瘤技术、抗体文库筛选技术、以及噬菌体表面展示技术。高通量、快速检测、高精准且操作简单的抗体筛选检测方法能够提高药物的开发成功率。


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    ▲ 抗体发现策略示意图


    ELISA作为经典的抗体筛选方法,通常在96孔板中进行检测,因需要包板和反复洗板等,具有通量低(96 tests)、实验耗时长(1.5days)等一系列问题。均相发光检测技术能够克服传统ELISA的检测弊端,仅需要简单的加样孵育就可完成检测,简便高效,更适合高通量抗体筛选的研究。



    均相发光免疫分析原理

    均相发光法是基于两种纳米微球(供体微球和受体微球),微球表面分别交联特异性抗体。在与待测物混合孵育后,两个抗体与抗原形成双抗夹心免疫复合物,此时两种微球的间距会保持在200nm以内。


    在激发光照射下,供体微球产生单线态氧并扩散至受体微球,受体微球接受能量产生发射光。通过感光元件收集光信号,采用数学拟合计算待测物中待测蛋白的浓度。当待测物中不含待测蛋白时,无免疫复合物的形成,两种微球的间距大于200nm,超出单线态氧的传递距离,则受体微球不产生发射光。


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    ▲ 均相发光原理示意图



    为度均相发光法单抗筛选套装


    均相发光技术采用纳米微球的反应模式,增加反应的表面积,具有均相反应,免清洗、高通量自动化操作、低背景、高重复性、高灵敏度、操作简单、样本需求少、检测范围宽等多种优势。为度推出的均相发光法(HiLA)的小鼠/人单抗筛选试剂,通过加样-孵育等步骤,可实现阳性克隆的高效筛选,大幅提升筛选效率。


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    ▲ 均相发光法(HiLA)单抗筛选原理图



    产品优势


    • 性能优异:灵敏度高,线性范围宽,结果可靠
    • 操作简便:仅需加样-孵育,1h内即获得结果
    • 节约样本反应仅需加入20μL,适合珍稀样本



    为度均相发光法单抗筛选套装性能展示


    1、均相发光法单抗筛选灵敏性和检测范围高于ELISA

    分别采用均相发光法和ELISA法进行检测单克隆抗体筛选的性能。


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    实验结果表明,均相发光法试剂盒在检测灵敏度和检测范围方面显著优于ELISA法,展现出更高的检测性能。

    2、均相发光法在亲和力测定的优势

    抗原的构象、表位的可及性、实验环境、检测机制以及抗体自身的特性差异,都可能导致同一抗体在不同免疫检测方法中表现出结合力的差异。由于ELISA为固相结合,具有暴露表位、非生理环境、亲和力评估偏差等局限性;而均相发光方法在均相结合,更接近生理环境、亲和力与动力学更真实,更加适合治疗性抗体开发。


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    案例分享:细胞上清小鼠IgG筛选实验


    为了对比ELISA和均相发光在小鼠上清IgG的筛选性能,采用均相发光法和ELISA法对细胞上清中的小鼠IgG进行平行筛选。ELISA的具体筛选实验流程参考,详情可点击:https://mp.weixin.qq.com/s/ZRgyHSQ9zy05aiQ4nkKrBg在均相发光法单抗筛选过程中,首先使用小鼠总lgG检测试剂盒(SH2505)对细胞上清中的IgG进行定量分析,并将其统一调整至相同浓度,有效消除因IgG浓度差异导致的结果偏差。


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    ▲ 筛选流程对比图
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    ▲ 筛选结果比图

    结果显示,两种方法的阴阳性符合率达到100%。与ELISA法相比,均相发光法筛选套装采用抗His抗体进行检测,避免了抗标签抗体可能产生的假阳性干扰,因此具有更高的检测可靠性。


    案例分:细
    为度单抗筛选套盒产品信息


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    清小鼠IgG筛选实验

    总之,在抗体筛选环节,为度生物提供小鼠/人单抗筛选试剂套装,克服传统ELISA的操作复杂耗时长等问题,可快速从杂交瘤上清中鉴定阳性克隆,大幅提升筛选效率,为后续开发奠定坚实基础。

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